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親和層析

 

1. 親和層析的基本原理:

在生物分子中有些分子的特定結構部位能夠同其他分子相互識別并結合,如抗原和抗體的識別結合、酶與底物(包括酶的競爭性抑制劑和輔助因子)的識別結合、激素與受體的識別結合,核酸中的互補鏈、多糖與蛋白復合體等等,這種結合既是專一的,又是可逆的。生物分子間的這種結合能力就稱為親和力。

將具有特殊結構的親和介質制成固相吸附劑放置在層析柱中,當要被分離的蛋白混合液通過層析柱時,與吸附劑具有親和能力的蛋白質就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質由于不被吸附,直接流出,從而與被分離的蛋白質分開,然后選用適當的洗脫液,改變結合條件將被結合的蛋白質洗脫下來,這種分離純化蛋白質的方法稱為親和層析。

親和層析具有高選擇性、高活性回收率、高純度,且純化過程簡單、迅速,分離效率高等特點,對分離含量極少又不穩定的活性物質尤為有效,成為生化工程中分離提純生物活性物質的重要方法。但親和層析必須針對某一分離對象,制備專一的層析介質和尋求層析的穩定條件,因此親和層析的應用范圍受到了一定的限制。

2. 載體的基本要求和選擇:

理想的載體應具有下列基本條件:(1)不溶于水,但高度親水;(2)惰性物質,非特異性吸附少;(3)具有相當量的化學基團可供活化;(4)理化性質穩定;(5)機械性能好,具有一定的顆粒形式以保持一定的流速;(6)通透性好,最好為多孔的網狀結構,使大分子能自由通過;(7)能抵抗微生物和醇的作用。

3. 影響層析分離的主要因素:

影響親和層析分離的主要因素有:(1)離子強度,主要影響靜電作用和疏水性相互作用;(2)pH值,通過改變配基和蛋白質上帶電基團的離子化程度對親和結合產生影響;(3)抑制氫鍵形成的物質,如脲和鹽酸胍,主要削弱親和結合作用力中的氫鍵;(4)溫度的改變會使分子和原子的運動劇烈程度發生改變,從而對親和作用產生影響;(5)在親和體系中加入一些離子或螯合劑,也將影響親和作用力。

 

  
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